TD Enzymologie et Biochimie Métabolique svi s4 2014/2015
Exercice N°1
Une enzyme E catalyse la réaction d'hydrolyse: A + H2O <=====> B + C
On suit la cinétique d'apparition du produit C, pour différentes concentrations en
substrat A.
Les valeurs obtenues (en µmoles de C par tube) sont présentées dans le tableau
suivant:
Une enzyme E catalyse la réaction d'hydrolyse: A + H2O <=====> B + C
On suit la cinétique d'apparition du produit C, pour différentes concentrations en
substrat A.
Les valeurs obtenues (en µmoles de C par tube) sont présentées dans le tableau
suivant:
1. Représentez les cinétiques et déterminez la vitesse initiale de chacune d'elle.
Dans quelle condition de concentration du substrat A s'est-on placé pour suivre ces
cinétiques?
Pourquoi ne se préocupe-t-on pas de la concentration de l'eau ?
2. Tracez la courbe de saturation et commentez la. Déterminez les paramètres cinétiques de l'enzyme à partir de cette représentation.
3. Déterminez les paramètres cinétiques à l'aide de la représentation des double inverses.
Expliquez la différence entre les valeurs déterminées à partir de ces deux
Dans quelle condition de concentration du substrat A s'est-on placé pour suivre ces
cinétiques?
Pourquoi ne se préocupe-t-on pas de la concentration de l'eau ?
2. Tracez la courbe de saturation et commentez la. Déterminez les paramètres cinétiques de l'enzyme à partir de cette représentation.
3. Déterminez les paramètres cinétiques à l'aide de la représentation des double inverses.
Expliquez la différence entre les valeurs déterminées à partir de ces deux
Exercice N°2
La phosphatase alcaline catalyse l'hydrolyse des esters de l'acide ortho-phosphorique.
Pour suivre l'activité enzymatique, on utilise un substrat synthétique, le
paranitrophénol-phosphate (M. M. = 371 g.mol
-1) qui libère du paranitrophénol (M. M. = 139 g.mol-1) qui absorbe à 410 nm avec un coefficient d'extinction pondéral: ε1% = 1260 g-1100 mL.cm-1. Chaque réaction est effectuée dans un volume réactionnel de 10 ml contenant 0,2 ml
d'enzyme à une concentration initiale de 10 mg/ml. On obtient les résultats suivants
(longueur du trajet optique = 1 cm):................................................
La phosphatase alcaline catalyse l'hydrolyse des esters de l'acide ortho-phosphorique.
Pour suivre l'activité enzymatique, on utilise un substrat synthétique, le
paranitrophénol-phosphate (M. M. = 371 g.mol
-1) qui libère du paranitrophénol (M. M. = 139 g.mol-1) qui absorbe à 410 nm avec un coefficient d'extinction pondéral: ε1% = 1260 g-1100 mL.cm-1. Chaque réaction est effectuée dans un volume réactionnel de 10 ml contenant 0,2 ml
d'enzyme à une concentration initiale de 10 mg/ml. On obtient les résultats suivants
(longueur du trajet optique = 1 cm):................................................
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